Ékspérimén Éléktroforésis Hémoglobin

Prinsip percobaan

Éléktroforésis hémoglobin tujuanana pikeun ngadeteksi sareng ngonfirmasi rupa-rupa hémoglobin normal sareng abnormal.

Alatan muatan béda jeung titik isoelektrik tina tipe hémoglobin béda, dina larutan panyangga pH tangtu, nalika titik isoelektrik hémoglobin leuwih handap pH solusi panyangga, hémoglobin mawa muatan négatip sarta migrasi ka anoda salila éléktroforésis. Sabalikna, hémoglobin kalayan muatan positif ngalir ka arah katoda.

Dina tegangan nu tangtu sarta sanggeus waktu éléktroforésis husus, hémoglobin kalawan muatan béda jeung beurat molekul némbongkeun arah migrasi béda jeung speeds. Hal ieu ngamungkinkeun pikeun misahkeun zona béda, sarta colorimetric atawa electrophoretic scanning analisis saterusna bisa dipigawé dina zona ieu keur ngitung rupa hémoglobin. Métode anu paling sering dianggo nyaéta éléktroforésis mémbran selulosa asétat pH 8.6.

Dina sitoplasma, gugus étiléna glikol (CHOH-CHOH) aya dina zat glikogén atawa polisakarida (saperti mukopolisakarida, mukoprotein, glikoprotein, glikolipid, jeung sajabana) dioksidasi ku asam périodik sarta dirobah jadi gugus aldehida (CHO-CHO). Gugus aldehida ieu ngagabung jeung réagen Schiff-beureum keunguan nu teu warnaan, ngabentuk pewarna ungu-beureum nu deposit dimana polisakarida aya dina sél. Réaksi ieu katelah périodik asam-Schiff (PAS) staining, baheulana disebut glikogén staining.

Métode ékspérimén

Bahan:Selulosa asétatmembrane, aparat éléktroforésis(DYCP-38C sareng catu daya DYY-6C), Unggul Sampel Loading Alat (pipet), spéktrofotometer, cuvettes kolorimétri, panyangga.

panyangga:

(1) pH 8,6 TEB panyangga: Beurat 10,29 g Tris, 0,6 g EDTA, 3,2 g asam boric, sarta nambahkeun cai sulingan pikeun 1000 ml.

(2) Borate Panyangga: Beurat 6,87 g boraks jeung 5,56 g asam boric, sarta tambahkeun cai sulingan kana 1000 ml.

Prosedur:

PNgalereskeun Solusi Hémoglobin

Candak 3 ml getih anu ngandung heparin atanapi natrium sitrat salaku antikoagulan. Centrifuge dina 2000 rpm salila 10 menit sarta piceun plasma. Ngumbah sél getih beureum tilu kali kalayan saline fisiologis (750 rpm, 5 menit sentrifugasi unggal waktos). Centrifuge dina 2200 rpm salila 10 menit sarta piceun supernatant nu. Tambahkeun cai sulingan dina jumlah anu sami, teras tambahkeun 0,5 kali volume karbon tetraklorida. Kocok kuat salami 5 menit, teras centrifuge dina 2200 rpm salami 10 menit pikeun ngumpulkeun solusi Hb luhur pikeun dianggo engké.

Soaking mémbran

Potong mémbran selulosa asétat kana strips ukuran 3 cm × 8 cm. Soak aranjeunna dina pH 8,6 TEB panyangga nepi ka pinuh jenuh, teras cabut jeung blot garing kalayan kertas filter.

Spotting

Anggo pipet pikeun némpelkeun 10 μl larutan hémoglobin sacara vertikal kana mémbran selulosa asétat (sisi kasar), kira-kira 1,5 cm ti tepi.

Éléktroforésis

Tuang leyuran panyangga borate kana chamber éléktroforésis. Teundeun mémbran selulosa asétat jeung sisi nempo di tungtung katoda chamber. Jalankeun dina 200 V pikeun 30 menit.

Élusi

Potong zona HbA sareng HbA2, tempatkeun dina tabung uji anu misah, teras tambahkeun 15 ml sareng 3 ml cai sulingan masing-masing. Gently ngocok pikeun elute hémoglobin lengkep, teras campur.

Colorimetry

Nol absorbansi maké cai sulingan pikeun solusi élusi jeung ngukur absorbance dina 415 nm.

Itungan

HbA2(%) = Nyerep tabung HbA2 / (Nyerep tabung HbA × 5 + Nyerep tabung HbA2) × 100%

Itungan Hasil Ékspérimén

Rentang Rujukan pikeun pH 8.6 TEB Buffer Selulosa Asétat Éléktroforésis: HbA > 95%, HbA2 1% -3.1%

Catetan

Waktu éléktroforésis teu kedah panjang teuing. Mémbran selulosa asétat teu kedah garing nalika éléktroforésis. Ngeureunkeun éléktroforésis nalika HbA sareng HbA2 jelas dipisahkeun. Éléktroforésis anu berkepanjangan tiasa nyababkeun difusi pita sareng kabur.

Ulah make loba teuing sampel. Cairan hémoglobin kaleuleuwihan bisa ngakibatkeun detachment pita atawa staining cukup, hasilna tingkat HbA falsely ngaronjat.

Nyegah kontaminasi mémbran selulosa asétat sareng protéin.

Arus teu kudu luhur teuing; Upami teu kitu, pita hémoglobin moal bisa misahkeun.

Salawasna kalebet spésimén ti jalma normal sareng hémoglobin abnormal anu diperyogikeun salaku kontrol.

Beijing Liuyi Biotéhnologi ngahasilkeun tank éléktroforésis profésional pikeun éléktroforésis hémoglobin anu modélDYCP-38Ctanki éléktroforésis mémbran selulosa asétat, sareng aya dua modél catu daya éléktroforésis anu sayogi pikeun tank éléktroforésis mémbran selulosa asétat.DYY-2CjeungDYY-6Csasayogian tanaga.

Samentara éta, Beijing Liuyi Biotéhnologi nyadiakeun mémbran selulosa asétat pikeun konsumén, sarta ukuran mémbran selulosa asétat bisa ngaropéa. Wilujeng sumping nanya kami pikeun sampel sarta informasi langkung.

Merek Beijing Liuyi gaduh sajarah langkung ti 50 taun di Cina sareng perusahaan tiasa nyayogikeun produk anu stabil sareng kualitas luhur di sakumna dunya. Ngaliwatan taun pangwangunan, éta pantes pilihan anjeun!

Urang ayeuna pilari mitra, duanana OEM tank éléktroforésis jeung distributor anu tampi.

Upami anjeun ngagaduhan rencana pameseran pikeun produk kami, punten tong ragu ngahubungi kami. Anjeun tiasa ngirim pesen ka kami dina email[email ditangtayungan]atawa[email ditangtayungan], atanapi mangga nelepon kami di +86 15810650221 atanapi tambahkeun Whatsapp +86 15810650221, atanapi Wechat: 15810650221